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    生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法
    來源: 時間:2024-11-05 10:52:15 瀏覽:4957次

    生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法

     

    生物樣本透射電鏡(Transmission Electron Microscopy,簡稱TEM是一種利用電子束穿透樣品進行成像和分析的顯微技術,具有極高的分辨率,能夠觀察到細胞結構、病毒、蛋白質等生物樣品的納米級細節為了獲得高質量的TEM圖像,樣品的制備至關重要。

    一、概述

    透射電鏡樣品制備的基本目標是保持生物樣品的自然狀態,同時提高樣品的電子透明度,以便電子束能夠穿透并產生清晰的圖像;制備過程通常包括固定、脫水、滲透、包埋、切片、染色和安裝等步驟。

    二、樣品制備方法

    (一)固定

    固定是樣品制備的第一步,目的是迅速殺死細胞,并盡可能保持其生前狀態;常用的固定劑有戊二醛和鋨酸,戊二醛能快速穿透細胞,固定細胞質和細胞膜,而鋨酸則固定細胞核和細胞器。

    1. 戊二醛固定:將樣品置于2.5%的戊二醛溶液中,4℃下固定數小時至過夜。

    2. 鋨酸固定:戊二醛固定后,用鋨酸進行后固定,通常在4℃下進行1-2小時。

    (二)脫水

    脫水是為了去除細胞中的水分,以便后續的滲透和包埋。常用的脫水劑有乙醇和丙酮,濃度從30%逐漸增加到100%

    (三)滲透

    滲透是將脫水劑替換為能與包埋劑相容的溶劑,如環氧樹脂,使包埋劑能夠滲透到細胞內部。

    (四)包埋

    包埋是將樣品嵌入到固體介質中,以便進行切片。常用的包埋劑有環氧樹脂、聚酯樹脂等。

    (五)切片

    切片是將包埋好的樣品切割成超薄(通常50-100納米)的切片,以供TEM觀察。切片方法有超薄切片和冷凍切片等。

    1. 超薄切片:使用超薄切片機,如萊卡UC6或鉆石刀,獲得超薄切片。

    2. 冷凍切片:在冷凍狀態下,使用冷凍切片機切割樣品。

    (六)染色

    染色是為了增強樣品的對比度,使其在TEM下更容易觀察。常用的染色劑有醋酸鈾、檸檬酸鉛等。

    (七)安裝

    將染色后的切片安裝在TEM專用的銅網或微柵上,準備進行TEM觀察。

    三、特殊樣品制備方法

    1. 細胞內特定結構的標記:對于需要觀察細胞內特定結構的情況,可以使用免疫金標記、免疫電子顯微鏡技術等對目標結構進行標記。

    2. 原位雜交:原位雜交技術可用于檢測細胞內特定的RNADNA序列,結合TEM技術,可以觀察到特定序列在細胞內的分布。

    3. 冷凍斷裂技術:冷凍斷裂技術適用于研究細胞膜的內部結構。樣品在冷凍狀態下斷裂,暴露出細胞膜的內部結構,然后進行TEM觀察。

    四、注意事項

    1. 在整個制備過程中,要盡量減少對樣品的損傷,保持其原始結構。

    2. 確保固定、脫水、滲透、包埋等步驟的試劑和設備清潔,避免污染。

    3. 切片時要保證切片的厚度均勻,以便獲得高質量的TEM圖像。

    4. 染色過程中要控制染色時間,避免過度染色。

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    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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