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一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

來源：時(shí)間：2023-11-23 16:18:24 瀏覽：22831次

一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

HE染色法，又稱蘇木素-伊紅染色法，是一種廣泛應(yīng)用于組織學(xué)、胚胎學(xué)和病理學(xué)教學(xué)與科研中的染色方法。

一、基本原理

HE染色法利用兩種染料，即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅，分別與細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生作用，使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過顏色改變其折光率，從而在光鏡下清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。染色過程中既有化學(xué)反應(yīng)，又有物理作用參與。

從化學(xué)反應(yīng)來看，組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)。細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合，細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合。因此，酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色，而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。從物理現(xiàn)象來看，主要有吸附和吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色，是細(xì)胞化學(xué)染色中最常用的一種方法。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品制備：對于貼壁生長細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1105/ml，滴加于蓋玻片上（置于6孔板中），培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。

2. 樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

3. 染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

4. 分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

5. 染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。

6. 吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。

若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則染色時(shí)間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

三、注意事項(xiàng)

1. 染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時(shí)間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行。一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。

3. 切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精，重新脫水。

4. 脫蠟。切片脫蠟后才能染色，且脫蠟應(yīng)徹底。脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時(shí)間。如果二甲苯是用過一段時(shí)間，切片又比較厚，室溫低應(yīng)增加脫蠟時(shí)間。

5. 在染色過程中，各種試劑的使用順序、濃度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟操作，以免影響染色效果。

6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)和儀器設(shè)備，妥善保存試劑，以免影響下次實(shí)驗(yàn)。

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